サンプルの目的

エピゲノムは、受精後の消去に続いてエピジェネティックマークが再確立される出生前段階で、環境によって引き起こされる変化の影響を最も受けやすくなります[15、16]。 提案された研究では、C. scorpioidesの幼虫の生存、発育時間、成体の形態学的および生殖特性に対する、胚発生の初期段階と後期段階での高温への曝露の影響を調査する予定です。 ncRNA は、実験対象者の精巣および卵巣組織から抽出され、その後のライブラリー構築および RNA 配列決定のために凍結されます。 このプロジェクトの目的は、熱帯変温動物が気候温暖化の影響を最も受けやすい生活史段階についての理解を深めることです。

この研究では、胚発生中の高温への曝露がこの新熱帯性偽サソリに悪影響を与えるという仮説を検証します。 エピジェネティックな再プログラミングは受精直後に起こるため、初期段階の胚で高温を経験した個体では、胚発生の後半で高温にさらされた個体と比較して、高温の悪影響がより深刻になることが予測されます。 また、初期の胚への曝露は、後期曝露よりも小さな ncRNA 発現プロファイルに大きな混乱を引き起こすと予測されています。

胚発生中の温度変化。 交配は3つのブロックに分けて行われ、ブロックごとに27対の血縁関係のないオスとメスが行われます。 メスは、日内変動する温度の 3 つの治療のうちの 1 つにランダムに割り当てられます。 後期曝露 (L) 処理と対照 (C) 処理です。 C 治療を受けた雌は、妊娠期間中、C. scorpioides の自然生息地の現在の平均温度である平均温度 27.3℃ に設定された保育器内で維持されます。 E 処理では、雌は胎生 1 ～ 5 日 (E1 ～ 5) の間、平均温度 29.3°C (+2°C) にプログラムされた同一の保育器に移され、その後対照保育器に戻されます。 L 雌は E5 まで制御温度で維持され、その後 E6 ～ 10 まで高温の保育器に切り替えられます。胚発生 5 日目に、すべての妊娠中の雌の育児嚢が高倍率で撮影され、雌の数が確認されます。胚を数えました。 メスの生殖状態が監視され、自然流産の症例が記録され、生存状況を記録するために、メスが出産し出産までに成功した原幼虫（第一段階の若虫）の数が数えられます。

ニンフを大人になるまで育てます。 各雌からの 20 個の原虫のサブセットを、個別のバイアル中で制御温度で成体段階まで飼育します。 誕生から成体になるまでの発育時間が記録され、生後 60 日以内に成体が得られなかったバイアルについては、幼虫は生存していないと記録されます。

大人の特徴。 形態的形質に対する温度の影響を評価するために、E、L、およびC処理で得た雄と雌の成体子孫を高倍率で写真撮影し、触肢（獲物捕獲および雄の戦闘に使用される付属器官）および頭胸の5つの形質を測定する。 生殖形質への影響を確認するために、3 つの治療で得た雄の子孫を非実験雌と交配させ、精子の数と生存率を定量化するために精子パケットが収集されます。 各処理から得られた雌の子孫は、非実験的な雄と交配される。 メスが産む初期段階の胚の数はその生殖能力の尺度となり、生殖の成功は生まれた若虫の数を数えることによって定量化されます。